نیوکلک ایسڈ نکالنے کی ٹیکنالوجی کا تعارف

ⅠNیوکلک ایسڈiتعارف

نیوکلک ایسڈ کو ڈی آکسیریبونیوکلک ایسڈ (DNA) اور رائبونیوکلک ایسڈ (RNA) میں تقسیم کیا گیا ہے، جن میں RNA کو مختلف افعال کے مطابق رائبوسومل RNA(rRNA)، میسنجر RNA(mRNA) اور ٹرانسفر RNA(tRNA) میں تقسیم کیا گیا ہے۔ڈی این اے بنیادی طور پر نیوکلئس، مائٹوکونڈریا اور کلوروفارم میں مرتکز ہوتا ہے، جبکہ آر این اے بنیادی طور پر سائٹوپلازم میں تقسیم ہوتا ہے۔جین کے اظہار کی مادی بنیاد کے طور پر، نیوکلک ایسڈ نکالنا سالماتی حیاتیات کی تحقیق اور کلینیکل مالیکیولر تشخیص میں انتہائی اہم کردار ادا کرتا ہے۔نیوکلک ایسڈ نکالنے کا ارتکاز اور پاکیزگی براہ راست بعد میں آنے والے پی سی آر، ترتیب، ویکٹر کی تعمیر، انزائم ہاضمہ اور دیگر تجربات کو متاثر کرے گی۔

Ⅱ نیوکلک ایسڈ نکالنے اور صاف کرنے کا طریقہ 

① فینول/کلوروفارم نکالنے کا طریقہ

فینول/کلوروفارم نکالنا DNA نکالنے کا ایک کلاسیکی طریقہ ہے، جو بنیادی طور پر نمونوں کے علاج کے لیے دو مختلف نامیاتی سالوینٹس کا استعمال کرتا ہے، پانی کے مرحلے میں ڈی این اے پر مبنی نیوکلک ایسڈ کو تحلیل کرتا ہے، نامیاتی مرحلے میں لپڈس، اور دو مرحلوں کے درمیان پروٹین۔اس طریقہ کار میں کم قیمت، اعلی پاکیزگی اور اچھے اثر کے فوائد ہیں۔نقصانات پیچیدہ آپریشن اور طویل وقت ہیں.

② Trizol طریقہ

Trizol طریقہ RNA نکالنے کا ایک کلاسیکی طریقہ ہے۔Trizol طریقہ کلوروفارم کے ساتھ سینٹرفیوگریشن کے بعد آبی مرحلے اور نامیاتی مرحلے میں تقسیم کیا جاتا ہے، جس میں آر این اے کو پانی کے مرحلے میں تحلیل کیا جاتا ہے، پانی کے مرحلے کو ایک نئی EP ٹیوب میں منتقل کیا جاتا ہے، isopropanol شامل کرنے کے بعد ورن حاصل کی جاتی ہے، اور پھر ایتھنول صاف کیا جاتا ہے۔یہ طریقہ جانوروں کے بافتوں، خلیات اور بیکٹیریا سے آر این اے نکالنے کے لیے موزوں ہے۔

③ سینٹرفیوگل کالم صاف کرنے کا طریقہ

سینٹرفیوج کالم پیوریفیکیشن کا طریقہ خاص طور پر خصوصی سلیکون میٹرکس جذب کرنے والے مواد کے ذریعے ڈی این اے کو جذب کرسکتا ہے، جب کہ آر این اے اور پروٹین آسانی سے گزر سکتے ہیں، اور پھر نیوکلک ایسڈ کو ملانے کے لیے ہائی نمک کم پی ایچ، کم نمک ہائی پی ایچ ویلیو ایلیوشن کو الگ کرنے اور نیوکلک ایسڈ کو صاف کرنے کے لیے استعمال کرسکتے ہیں۔فوائد اعلی طہارت کی حراستی، اعلی استحکام، نامیاتی سالوینٹس کی ضرورت نہیں، اور کم قیمت ہیں۔نقصان یہ ہے کہ اسے قدم بہ قدم سینٹرفیوج کرنے کی ضرورت ہے، مزید آپریشن کے اقدامات۔